基于sgRNA的相關(guān)問題討論

1、Q:請(qǐng)教老師，我設(shè)計(jì)的sgRNA?與非靶序列相似度多大時(shí)會(huì)把這個(gè)非靶標(biāo)基因也編輯了？是否可以理解為：在遠(yuǎn)離pam端有4個(gè)及以內(nèi)的與靶序列不同堿基的序列都是可以被編輯的。即脫靶到了那些序列。A:有脫靶機(jī)會(huì)，但通常識(shí)別活性會(huì)比較低，一般地，脫靶是需要盡量避免的。如果想要敲除兩個(gè)以上基因，需要針對(duì)要敲除的基因分別設(shè)計(jì)crispr以制備不同的sgRNA。?2.Q:crispr/Cas13在gRNA設(shè)計(jì)

基因編輯質(zhì)粒的相關(guān)問題討論-南京堯順禹斑馬魚基因編輯

基于基因編輯質(zhì)粒的相關(guān)問題討論1、Q:利用crsipr敲除，可以用瞬轉(zhuǎn)質(zhì)粒嘛？A:可以！這樣做得到的細(xì)胞是mosaic，即有的細(xì)胞是基因組編輯了，有的則沒有；有的細(xì)胞基因敲除了，有點(diǎn)則沒有。如果只要改變部分細(xì)胞基因即可的話，則可以通過瞬轉(zhuǎn)，如以原代細(xì)胞為研究對(duì)象。?2、Q:保存領(lǐng)到的質(zhì)粒和菌液，說明書上說質(zhì)粒保存溫度-20℃/-80℃，怎么決定？我把領(lǐng)到的裝質(zhì)粒和菌液的離心管插到一個(gè)管插上直接放進(jìn)

斑馬魚模型在化妝品研究中的運(yùn)用（南京堯順禹基因編輯斑馬魚模型、毒理研究）

化妝品已成為人們生活中的必需品，安全性和功效性評(píng)價(jià)是化妝品研發(fā)過程中非常重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。斑馬魚具有傳代時(shí)間短、飼養(yǎng)方便、價(jià)格低廉以及便于大規(guī)模篩選等優(yōu)勢(shì)，是一種有效、可靠、高通量的模式生物。目前，對(duì)斑馬魚致死和致畸的統(tǒng)計(jì)結(jié)果可用于化妝品原料的安全性評(píng)價(jià)和防曬劑抗紫外線的功效評(píng)價(jià)，其身體表面黑色素?cái)?shù)量的變化可用于斑類白原料的功效評(píng)價(jià)，均呈現(xiàn)出良好的發(fā)展優(yōu)勢(shì)和應(yīng)用前景。用斑馬魚評(píng)價(jià)化學(xué)品等健康安全的實(shí)